血鈣濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
血鈣幾乎全部存在于血漿中，所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式，
其中只有離子鈣直接起生理作用，它與結(jié)合鈣處于動(dòng)態(tài)平衡，并受血液 pH 的影響。血鈣水
平與多種重要的生理功能相關(guān)，過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測(cè)血液
中游離鈣濃度。
測(cè)定原理：
在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與 GBHA 反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA 復(fù)合物，在 520nm 有吸收峰；通過(guò)測(cè)定 520nm 吸光度，計(jì)算游離鈣濃度。
自備儀器和用品：
可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、石英比色皿/96 孔板、無(wú)水甲醇、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶（空瓶，試劑自備）。取10 mL試劑瓶。依次加入9 mL無(wú)水甲醇和1mL丙酮，蓋緊混勻即可。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1 瓶，3μmol/mL，4℃保存。
血鈣濃度測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到520nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸餾水12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A空白管。做一個(gè)空白管即可。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取石英比色皿/96孔板，依次加入標(biāo)準(zhǔn)液12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管即可。
4. 測(cè)定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液樣品12μL，試劑一50μL，混勻；再加入試劑二50μL，混勻；zui后加入試劑三100μL，混勻；靜置5min后于520nm測(cè)定吸光度A測(cè)定管。記為 A 測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次，做三次重復(fù)。
血鈣濃度計(jì)算公式：
血鈣含量(μmol/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 樣品總=3×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)液：3μmol/mL； V 樣總：樣品總體積，1 dL=100 mL。
注意事項(xiàng)：
1. 宜早晨空腹采血，并且采血后應(yīng)該盡快完成測(cè)定。
2. 靜置 5 分鐘后立即測(cè)定。
3. 加試劑三后，應(yīng)該在 30 min 內(nèi)完成該管的測(cè)定。
4. zui低檢出限為0.1μmol/mL。
