土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說明書
微量法
產品內容:
試劑一:甲苯1mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體7.5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入22mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體22mL×1 瓶,4℃保存。
產品說明:
S-SC 能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收,其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、
磷含量,微生物數量及土壤呼吸強度密切關,是評價土壤肥力的重要指標。
S-SC 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在510nm 有特征光吸收,在一定范圍內510nm 光吸收增加速率與S-SC 活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
操作步驟:
一、加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.03 | 0.03 |
試劑一(μL) | 5 | 5 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴15min | ||
試劑二(μL) | 75 | 75 |
試劑三(μL) | 220 |
|
蒸餾水(μL) |
| 220 |
充分混勻,放入37℃水浴培養(yǎng)24 小時,10000 g,4℃,離心5min,取上清液 | ||
上清液(μL) | 85 | 85 |
試劑四(μL) | 215 | 215 |
充分混勻,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,蒸餾水稀釋10倍(可以吸取100μL,加入900μL 蒸餾水稀釋;若吸光度大于4,可以加大稀釋倍數),取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 處讀吸光值A。計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。
二、S-SC 活性計算:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 4.9x -0.062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每g 土樣中產生1mg 還原糖定義為一個S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.4×(A+0.062)
10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣本質量,0.03g。
b. 用96 孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 2.45x -0.062;x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每g 土樣中產生1mg 還原糖定義為一個S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反總÷W÷T =40.8×(A+0.062)
10:稀釋倍數;T:反應時間,1d; V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣品質量,0.03g。