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豬圓環(huán)病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介
點(diǎn)擊次數(shù):594 更新時(shí)間:2022-10-27

豬圓環(huán)病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒

 

 本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),是針對(duì)豬瘟病毒設(shè)計(jì)的檢測(cè)體系,用于疑似感染動(dòng)物血清或組織等樣本的檢測(cè)。

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬瘟病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

英文名稱:Classical Swine Fever Virus Fluorescent PCR test kit

【試劑盒組成】

組成成份(25Tests/kit

規(guī)格

核酸擴(kuò)增試劑

 

RT-PCR反應(yīng)液

526.5µl×1

Taq(5U/µl)

8.5µl×1

PCR enhancer

5.5µl×1

對(duì)照品

 

陰性對(duì)照

25µl×1

陽性對(duì)照

25µl×1

注:不同批號(hào)的試劑組份不可混用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

本試劑盒貯存于-20℃的條件下有效期為6個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見包裝袋和外包裝盒。

【適用儀器(熒光PCR檢測(cè)儀)

Ø   ABI公司Prism7000、7300、7500系列

Ø   RotorGene系列

Ø   Bio-Rad公司的iCycler系列

【自備試劑】

核酸提取試劑。

【樣本采集、存放及運(yùn)輸】

1.樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

2.存放:分離后的血清或者血漿樣本在2—8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(最多凍融3次)。

3.運(yùn)輸:采用冰壺或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

【檢驗(yàn)方法】

1.樣本處理:

用戶可采用病毒RNA提取試劑盒提取RNA用于檢測(cè)或保存于-20℃(-80℃更佳)以待檢測(cè)。說明:陽性對(duì)照及陰性對(duì)照無需提取,直接上樣。

2.擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū)):

從試劑盒中取出RT-PCR 反應(yīng)液、Taq酶及PCR Enhancer,室溫融化并振蕩混勻后,2000rpm離心10秒。設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為nn = 樣本數(shù) + 1管陰性對(duì)照 + 1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

 

試劑

RT-PCR反應(yīng)液

Taq

PCR enchancer

用量

19.5 µl

0.3µl

0.2 µl

計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積離心管中,充分混合均勻,2000rpm離心10秒,向設(shè)定的n個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入20 µl,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

1.加樣(樣本處理區(qū)):

向所設(shè)定的n個(gè)PCR 反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各5µl,蓋緊管蓋,轉(zhuǎn)移至檢測(cè)區(qū)。將PCR反應(yīng)管排好放入PCR儀內(nèi),記錄樣本擺放順序。

2.PCR擴(kuò)增(檢測(cè)區(qū))

4.1       循環(huán)條件設(shè)置

50℃:10 min;

95℃:3 min

95℃:10sec, 60: 1min  40個(gè)循環(huán)。

熒光信號(hào)收集設(shè)在60℃。反應(yīng)體系設(shè)為25ul。

4.2       儀器檢測(cè)通道選擇

待測(cè)熒光為FAM熒光素,熒光PCR檢測(cè)儀熒光信號(hào)收集設(shè)定為FAM熒光素。

3.結(jié)果分析條件設(shè)定:

5.1       閾值(threshold)設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對(duì)照曲線(無規(guī)則的噪音線)的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。

5.2       基線(baseline)應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號(hào)無較大波動(dòng)),起始點(diǎn)(循環(huán)數(shù))應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng),終止點(diǎn)(循環(huán)數(shù))應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1-2個(gè)循環(huán)。

注:具體設(shè)置方法請(qǐng)參照各儀器使用說明書。

4.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):

陰性對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性;

陽性對(duì)照的Ct值應(yīng)小于等于32.0。

否則,此次實(shí)驗(yàn)視為無效。

1.結(jié)果判斷:

Ø Ct值無讀數(shù)的樣本為陰性。

Ø Ct≤38.0的樣本為陽性。

Ø Ct值大于38.0的樣本建議重做。

重做結(jié)果Ct值<40.0為陽性,否則為陰性。

【試劑盒使用注意事項(xiàng)】

1. 有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范請(qǐng)嚴(yán)格按照行業(yè)行

2. 本試劑盒僅用于體外檢測(cè)。

3. 實(shí)驗(yàn)請(qǐng)嚴(yán)格分區(qū)操作:

第一區(qū):PCR前準(zhǔn)備區(qū)——準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑;

第二區(qū):樣本處理區(qū)——待測(cè)樣本和對(duì)照品處理;

第三區(qū):檢測(cè)區(qū)——PCR擴(kuò)增檢測(cè)。

4. 各區(qū)物品均為專用,不得交叉使用,避免污染,實(shí)驗(yàn)后即請(qǐng)清潔工作臺(tái)。

5. 試劑盒內(nèi)各試劑使用前,充分融化后請(qǐng)稍事離心。

6. 在-20℃保存的樣本裂解產(chǎn)物,應(yīng)在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。

7. 分裝有反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)扣蓋或裝入密實(shí)袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本區(qū)。

8. 加樣時(shí)應(yīng)使樣品完全落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品粘附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。

9. 擴(kuò)增完畢立即取出反應(yīng)管,密封在專用塑料袋內(nèi),丟棄于指定地點(diǎn)。

10. 反應(yīng)液分裝時(shí)應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。

11. 實(shí)驗(yàn)中用過的吸頭請(qǐng)直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi),并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

12. 工作臺(tái)及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒

 

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