| 更新時間： | 2021-01-12 |
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| 廠商性質： | 生產廠家 |
提供商: 上海研謹生物服務名稱: 真核表達載體構建實驗流程規(guī)格: 實驗服務 價格： 3000元收費標準/服務周期/提供結果:歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!
真核表達載體構建實驗服務
一.服務介紹
分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴 增特定DNA**片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體,通過轉化與轉導的方式，引入適合的寄主體內得到復制與擴增，然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴增。
二、實驗原理
外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種: T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在--起的功能， 而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌連接酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應分為3步:首先，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶- AMP復合物;然后,酶一AMP復臺物再結合到具有5磷酸基和3羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化;后產生一個新的磷酸二酯鍵， 把切口封起來。
DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。
連接反應的溫度在37°C時有利于連接酶的活性但是在這個溫度下，粘性末端的氫鍵結合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個折中溫度，即12-16°C， 連接12-16h(過夜), 這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對結構的穩(wěn)定。
三、實驗流程
1.目的DNA的擴增和純化;
2.連接反應;
3.電泳檢測連接產物。
四、客戶提供
樣本DNA，基因序列,試劑盒。
五、公司提供
構建好的載體，電泳膠圖，測序結果。
實驗代做服務：
免疫組化IHC染色實驗服務 | 細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務 | 試劑盒免費代檢測 | 實驗室代做實驗項目
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透射電鏡服務實驗服務 | 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡 | 核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務 | 免疫共沉淀（CHIRP）實驗 |
RNA結合蛋白免疫沉淀（RIP）實驗代做 | 酶聯免疫（ELISA）技術服務 | 雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒 | 喹諾酮類快速檢測試劑盒 |
組織芯片/微陣列定制技術服務
| 染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務
| 多因子液相芯片技術（Luminex）實驗 | 免疫細胞化學ICC實驗服務 |
ATP/ADP檢測實驗服務 | 蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務 | 蛋白相互作用分析 | 堿性磷酸酶染色實驗服務 |
PKC活性檢測實驗 | 非標定量實驗 （Label-free）
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細胞生長曲線的測定 | 掃描電鏡服務 | NF-KB p65活性檢測實驗
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