更新時(shí)間: | 2016-08-09 |
訪問量: | 677 |
廠商性質(zhì): | 生產(chǎn)廠家 |
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書價(jià)格公道、*,售后服務(wù)完整,并提供免費(fèi)代檢測服務(wù)!轉(zhuǎn)化生長因子本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的含量。
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)酶聯(lián)免疫試劑盒使用說明書
轉(zhuǎn)化生長因子本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠轉(zhuǎn)化生長因子 β(TGF-β )水平。用純化的大
鼠轉(zhuǎn)化生長因子 β (TGF-β )抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加
入轉(zhuǎn)化生長因子 β(TGF-β ),再與 HRP 標(biāo)記的 TGF-β 抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體
復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸
的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子 β (TGF-β )呈正相關(guān)。
用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠轉(zhuǎn)化生長因
子β(TGF-β )濃度。
轉(zhuǎn)化生長因子試劑盒組成:
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個(gè) 1 個(gè)
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品:270ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
轉(zhuǎn)化生長因子樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞
2
濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20分
鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS ,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4),用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
轉(zhuǎn)化生長因子操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul ,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為 180ng/L,120ng/L ,60ng/L ,30ng/L , 15ng/L )。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將 30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50 μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
轉(zhuǎn)化生長因子注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
3
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值
代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
試劑盒性能:
1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為0.95 以上。
2. 批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和11%
保存條件及有效期:
1. 試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒