更新時間: | 2023-10-23 |
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廠商性質: | 生產廠家 |
提供商:上海研謹生物服務名稱:核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色技術服務規(guī)格:樣本價格:60元收費標準/服務周期/提供結果:歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!
核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色技術服務
一.核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色技術服務簡介
核仁組成區(qū)(NORs)是染色體上的一個編碼核糖體RNA(rRNA)的片段,存在于DNA特異性環(huán)上,凸向核仁。在電鏡下,核仁組成區(qū)為在電子致密區(qū)中的境界不清的淺染區(qū)域。在石蠟切片上,在核仁中見到的每一個點狀反應顆粒有可能代表多 個AgNOR位點。核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色主要特點是操作簡便、批量染色的較為經濟, AgNOR位點的數量增加與細胞增殖性增加有關,對于良惡性腫瘤的鑒別具有一定的意義。
二、試劑配制
1. AgNOR染色液
甲液:明膠2 g溶于雙蒸水至99 ml,在60°C使之*溶解,再加入純甲酸1 ml搖勻待用。
乙液: AgNO350 g溶解于雙蒸水中至100 ml, 4°C冰箱保存。
2. AgNOR工作液
取甲液10 ml,乙液20 ml臨用前混合。
三、染色步驟
1.切片脫蠟至水
2.雙蒸水洗2次
3.AgNOR工作液中(25°C) 浸染30分鐘(暗處進行) (鏡下觀察)
4.脫水,透明,封固
5結果:油鏡觀察,細胞核及胞質背暴為淡黃色,AgNOR呈棕黑色顆粒狀。
四、樣本說明
1、 石蠟切片
取材: 1.組織離體后需及時固定; 2.組織標本不宜過大、過厚。
固定: 1.固定液: 10%福爾馬林(4%Paraformaldehyde) 或10%中性甲醛: 2.用量: -般固定液的量與組織體積比為
10:1~20:1; 3. 固定:適宜的固定時間,主要根據材料的大小松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片經60°C烤片3-5小時后,可于常溫或4°C干燥保存。
2.冰凍切片
取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定:樣本冰凍切片后,應立即放入甲醇、acetone. 95%酒精、 4%Paraformaldehyde等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然風干,密封后置于-80°C. -20°C保存, 盡快用于后續(xù)實驗。
3.細胞塊石蠟切片
細胞量較多的樣品,可離心分離所需細胞,用中性甲醛固定后制作成瓊脂細胞塊,然后按照制作石蠟切片的操作流程進行切
片。
4、細胞爬片
在孔板里做的細胞爬片,爬片取出后,用PBS洗滌2次(根據研究目的,PBS洗滌可選擇不做)。用4%Paraformaldehyde49C固定15分鐘,將表面液體吹干,置于-20°C保存。若在短時間內即開展實驗,可在加固定液后,于4°C冰箱中放置一段時間。
5.細胞涂片細胞涂片常用的固定液有95%酒精(為常用)、酒精 Glacial acetic acid solution. Ethyl ether-酒精液和
Carney's液等。
五、注意事項
1.常用的固定液為中性甲醛和4%Paraformaldehyde, 能使大多數抗原保存良好,適用于免疫組織化學。
2.病理實驗切片好是防脫片,以免實驗過程中出現掉片。若客戶提供切片,應告知切片有無防脫處理。
3.骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實驗過程中有較高的掉片幾率。
4.客戶可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%Paraformaldehyde或10%中性甲醛固定, 如組織塊極小請事先說明) . 蠟塊
或切片(使用免疫組化切片,以避免實驗過程中掉片)
5.待檢測蛋白的種屬、實驗分組情況及實驗背景資料、其他具體要求等需事先說明。
6.若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進行實驗,需進行脫鈣處理。
7.浸泡在固定液中的組織樣本,在運輸中容器需密封,防止破碎、滲漏。
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