豬偽狂犬 gE 抗體ELISA 檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
英文名稱:ELISA Kit for detection of antibody against Pseudorabies virus gE glycoprotein
【規(guī)格】
96T×2/盒
【作用與用途】
測定豬血清中豬偽狂犬 gE 抗體,用于偽狂犬病毒gE 基因缺失疫苗免疫豬與自然感染豬的鑒別診斷
【自備器材】
1.酶標(biāo)儀,雙波長 450/630nm 濾光片
2.精q的微量移液器(單道 1-100μl、0.5-10μl、多道 30-300μl)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.洗液吸移裝置
6.一次性槍頭(10μl,200μl)
7.去離子水
【主要組成成份】
1 | PRV-gE 抗原包被板 | 96T×2 |
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2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
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3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
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4 | PRV-gE-IgG 陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
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5 | PRV-gE-IgG 陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
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6 | 顯色劑 | 12ml*2 | 橙色帽 |
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7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
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8 | 20X 濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
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9 | 蓋板膜 | 2 張 |
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10 | 說明書 | 1 份 |
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【樣本要求】
1.本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,2℃~8℃貯存應(yīng)不超過一周,長期應(yīng)在-20℃以下保存。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫 30min,可以獲得J結(jié)果。
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作 40 倍稀釋(即:5μl 血清加 195μl 樣品稀釋液),混合均勻。
3.陽性對照陰性對照稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將陽性對照血清和陰性對照血清作4倍稀釋(即:50μl血清加150μl樣本稀釋液),混合均勻。
4.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋 20 倍(即 1ml 濃縮洗滌液加 19ml 水),即可使用。注意:使用前要使結(jié)晶*溶解。
【檢驗(yàn)方法】
1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時(shí),設(shè)陰、陽性對照各 2 孔,分別加入稀釋后的陰、陽性對照血清 100μl 于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加 100μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。
2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置 37℃溫育 30 分鐘。
3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反
應(yīng)板孔,靜置 10 秒甩出,洗滌 3 次,后
一次洗滌后在吸水紙上拍干。
4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物 100μl。
5.溫育:加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板
膜,置 37℃溫育 30 分鐘。
6.洗板:同步驟 3。
7.顯色:每孔加顯色劑 100μl,振蕩混勻,
37℃避光反應(yīng) 10 分鐘。
8.終止:每孔加終止液 50μl,振蕩 10 秒,
充分混勻,終止后即讀數(shù)。
9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD 值)。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測各孔的 OD 值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均 OD 值≥0.5,陰性對照孔的平均 OD 值必須<0.1;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由 S/P 值決定,S/P 值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本 OD450/630 值-NCx)/(PCx-NCx),
其中 NCx表示陰性對照孔平均 OD450/630 值
(0.05 以下的數(shù)值按 0.05 計(jì)算);PCx表示陽性對照孔平均 OD450/630 值;
當(dāng)樣本的 S/P≥0. 25時(shí)判為陽性;樣品 S/P 值<0.25時(shí)判為陰性;
【注意事項(xiàng)】
1.本試劑盒僅供研究使用。
2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不同
批次的組分混合使用。
3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。
4.使用前,濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫
(20~25℃),并搖動使沉淀溶解(hao在
37℃水浴鍋中加熱5~10分鐘),然后用去離
子水作 20倍稀釋(例如:50ml的濃縮洗滌液
加上 950ml 蒸餾水),混勻,稀釋好的洗滌
液在 2~8℃可以存放 7-10 日。
5.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鐘,或5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。
6.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平
衡至潮氣干盡后方可拆開,未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封 2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于 2℃-8℃避光保存。
7.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常
校對其準(zhǔn)確性。
8.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有
游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)
立即用大量清水沖洗干凈。
【儲存條件及有效期】
于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有期
12 個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒。
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